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    酵母和細菌蛋白質(zhì)的代謝放射標(biāo)記的方法

    發(fā)布時間: 2021-11-08  點擊次數(shù): 1369次
    材料與儀器

    細胞
    基本培養(yǎng)基

    實驗步驟

    1. 接種細胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養(yǎng)基,于合適溫度中度振蕩培養(yǎng)過夜。

    2. 用新鮮的基本培養(yǎng)基稀釋培養(yǎng)物,繼續(xù)溫育至 107 細胞/ml (酵母)或?qū)?shù)期中期(細菌)。

    3. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細胞,用無硫酸鹽基本培養(yǎng)基重懸至 107 細胞/ml(酵母)或 5X108 細胞/ml(細菌)。

    4. 加 H235SO4 至終濃度 20 μCi/ml。于適宜溫度輕度振蕩培養(yǎng) 1 小時(酵母)或 20 分鐘(細菌)。

    5. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細胞,吸出培養(yǎng)基,倒入放射性廢料桶。

    6. 用冰冷的基本培養(yǎng)基重懸細胞,如第 5 步離心收集細胞。將上清倒入放射性廢料桶。用巴氏滴管吸去離心管壁殘存的上清。


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